熒光分光光度計測試注意事項

①樣品應盛在四面透光的石英比色皿（熒光池）中，如果是揮發(fā)性樣品應使用帶塞的熒光池。

　?、谠跓晒夥治鰰r(shí)，為了得到穩定可靠的數據，一般需要開(kāi)機預熱氙燈大約30min。如果儀器光源采用的是閃爍氙燈，預熱時(shí)間可以縮短到10min左右。對某些易感光、易分解的熒光物質(zhì)，盡量采用長(cháng)波長(cháng)、低人射光強度及短時(shí)間光照。

　?、蹨囟茸兓梢馃晒鈴姸鹊母淖?。通常降低溫度，有利于提高熒光量子產(chǎn)率，熒光強度增大。溫度影響熒光強度的顯著(zhù)程度因樣品而異，大部分熒光物質(zhì)的熒光強度受溫度影響不大，測試溫度變化不超過(guò)±3℃，對測試結果幾乎無(wú)影響。

　?、墚敓晒馕镔|(zhì)是弱酸或弱堿時(shí)，溶液的pH對熒光強度有較大影響。因為弱酸或弱堿在不同酸度中，分子和離子的電離平衡會(huì )發(fā)生改變，而熒光物質(zhì)的熒光強度會(huì )因其離解狀態(tài)發(fā)生改變。以苯胺為例：在pH=7～12的溶液中會(huì )產(chǎn)生藍色熒光，在pH<2或ph>13的溶液中都不產(chǎn)生熒光。再如，維生素B2（核黃素）在430～440nm藍光照射下會(huì )發(fā)出綠色熒光，λem為535nm。它在pH=6～7的溶液中熒光強度最大，而在pH=11時(shí)熒光消失；但在堿性溶液經(jīng)光線(xiàn)照射發(fā)生分解作用或在酸性KMn04氧化下都會(huì )生成熒光強度比維生素B2強得多的黃光素，并可溶于氯仿。利用此性質(zhì)可提高測定的靈敏度和選擇性。

　?、莘肿咏Y構中存在π-π共軛的熒光物質(zhì)在極性溶劑中，熒光效率顯著(zhù)增強。溶液中表面活性劑的加入能夠顯著(zhù)提高熒光強度。

　?、奚⑸浜屠⑸涫侨軇┑膬煞N散射光，應注意不要誤把瑞利散射和拉曼散射光譜當做熒光光譜。瑞利散射光波長(cháng)與激發(fā)光波長(cháng)相同，拉曼散射與激發(fā)光波長(cháng)不同，而熒光物質(zhì)的熒光波長(cháng)與激發(fā)光波長(cháng)無(wú)關(guān)，因此可以通過(guò)選擇適當的激發(fā)波長(cháng)將拉曼散射光與熒光分開(kāi)。在測試時(shí)選擇合適的狹縫寬度，或者空白扣除，也可以對散射光的影響進(jìn)行校正。

　?、邿晒馕镔|(zhì)分子與溶液中其它物質(zhì)分子之間作用導致熒光強度降低，常見(jiàn)的熒光猝滅劑，如鹵素離子、重金屬離子、硝基化物質(zhì)、重氮化合物等。溶液中的溶解氧也能引起幾乎所有的熒光物質(zhì)產(chǎn)生不同程度的熒光熄滅現象，因此，在較嚴格的熒光實(shí)驗中必須除02。

　?、鄿y試過(guò)程中注意不要肉眼盯著(zhù)氙燈光源看，以防對眼睛造成損傷。

　?、醿x器房應注意經(jīng)常通風(fēng)，避免產(chǎn)生的臭氧在室內富集。