比色計的概念與原理

1.比色計的概念

比色計與光度計的概念不同，比色計是一種化學(xué)分析儀器。利用光線(xiàn)

分別透過(guò)標準溶液(或玻片)和試樣溶液而進(jìn)行比較顏色強度的儀器。用于比色分析。一般分為目視比色計和光電比色計，而光度計是屬于后者。

2.比色計和光度計的比較

比色計是光度計中的一種,專(zhuān)門(mén)比色用. 光度計除比色外還可作其他應用.

比色計特指可見(jiàn)光比色分析的檢測儀器；光度計可涵蓋紫外；可見(jiàn)；紅外多個(gè)譜區。

區別主要有兩點(diǎn)：1.單色器：比色計采用濾光片濾除其他的雜光，光線(xiàn)的純度低，精度差；分光光度計采用分光系統（光柵或菱鏡）獲取單色光，光線(xiàn)的純度高，精度好。2.比色計一般用于可見(jiàn)光，只有幾塊濾光片，使用范圍狹窄；分光光度計可在儀器工作波長(cháng)范圍之內任意選取所需波長(cháng)

比色計簡(jiǎn)單，便宜，測定方便，就是結果精度不高，主要用于界限測定等方面；

光度計精密，貴重，測定結果精確。

兩種設備適用范圍不一樣，當然比色計能做的光度計都能做，只是要看用在什么方面，有沒(méi)有這個(gè)必要。

3.比色計原理

比色計原理

當單色光通過(guò)厚度相同，而濃度很小的溶液時(shí)，根據朗伯—比爾定律，光被溶液吸收的程度，稱(chēng)為吸收度，與溶液的濃度成正比，與溶液的厚度成正比，即A=εCL，式中：A為吸收度，C為溶液的濃度，L為溶液的厚度，ε為消光系數。

由朗伯—比爾定律得，當一束單色光通過(guò)一溶液時(shí)，由于溶液吸收一部分光能，使光的強度減弱。若溶液的濃度（或厚度）不變，則溶液的厚度（濃度）愈大，光線(xiàn)強度的減弱也愈明顯。

用同樣的方法配制的標準溶液和待測溶液，其濃度分別為C1和C2，對同類(lèi)溶液ε相同，當厚度也相同時(shí)則：

A1=εC1L

A2=εC2L

C2=（A2/A1）*C1

式中A1,A2可由羅維朋比色計直接讀出，C1為標準溶液的已知濃度，據此可算出待測溶液的濃度。

朗伯—比爾定律

許多化學(xué)物質(zhì)的溶液具有顏色（無(wú)色的化合物也可以加顯色劑經(jīng)反應生成有色物質(zhì)），當有色溶液的溶度改變時(shí)，顏色的深淺也隨之改變，濃度愈大，顏色愈深。因此，可以用比較溶液顏色深淺的方法來(lái)測定有色溶液的濃度。這種方法叫做比色分析法。

一、 朗伯—比爾定律

當一束單色光通過(guò)有色溶液時(shí)，入射光線(xiàn)的一部分被器皿反射回來(lái)，一部分被溶液吸收，另一部分則透過(guò)溶液，如圖所示。它們之間有以下關(guān)系：

Io=Ia+Ir+It      1-1

式中：Io—入射光強度，Ia—吸收光強度，Ir—反射光強度，It—透過(guò)光強度

由于在實(shí)際測定時(shí)，所用的比色皿都是同質(zhì)料用規格的。反射光的強度為一定值，不會(huì )引起測量誤差，所以反射光的影響可以不加考慮。則上式可簡(jiǎn)化為：

Io=Ia+It        1-2

從式1-2可知：當入射光強度Io為一定時(shí)，被吸收光強度Ia愈大，則透過(guò)光強度It愈小。也就是說(shuō)：光強度的減弱僅與有色溶液對光線(xiàn)的吸收有關(guān)。

那么，溶液對光線(xiàn)的吸收與哪些因素有關(guān)呢？實(shí)驗證明：溶液的濃度C愈大，液層厚度L愈厚（即光線(xiàn)在溶液中所經(jīng)過(guò)的路程愈長(cháng)），則溶液對光線(xiàn)吸收的愈多。它們之間的關(guān)系有下式?jīng)Q定：

lg = KCL      1-3

這個(gè)公式就是朗伯—比爾（Lambert---Beer）定律。

公式中的K稱(chēng)為吸光系數，它表示有色溶液在單位濃度和單位厚度時(shí)的吸光度。在入射光的波長(cháng)、溶液種類(lèi)和溫度一定的條件下，K為定值。吸光系數是有色化合物的重要特性之一，在比色分析中有著(zhù)重要的意義。K值愈大，表示該物質(zhì)對光的吸收能力愈強，濃度改變時(shí)引起吸光度的改變愈顯著(zhù)，因此比色測定時(shí)靈敏度愈高。

朗伯-比爾定律即有色溶液對一定強度光的吸收程度，與液層厚度和溶液中有色物質(zhì)濃度的乘積成正比。其中朗伯定律說(shuō)明吸收光與厚度間的關(guān)系；比爾定律說(shuō)明吸收光與濃度間的關(guān)系。

朗伯—比爾定律在光電比色計中的應用

假定有兩種有色溶液，其中一種是已知濃度的標準溶液，另一種是待測溶液。根據公式：

在標準溶液中：As=KsCsLs 1-4

在待測溶液中：Ax=kxCxLx 1-5

將式1-4除以式1-5可得：

= 1-6

如果上述兩種溶液的液層厚度相等、溫度相同而且是同一種物質(zhì)的兩種不同濃度的溶液，測定時(shí)所選用的單色光的波長(cháng)亦相同，則有：

Ls=Lx、Ks=Kx ，代入式1-6可得：

= 1-7

由此可見(jiàn)，在上述條件下，吸光度與濃度成正比。這一關(guān)系式就是光電比色計的設計依據，也是比色分析的基本計算公式之一。式中標準溶液的濃度Cs為已知，As和Ax可用光電比色計測量出來(lái)，則待測溶液的濃度Cx即可求出：

Cx = × Cs 1-8

由于在實(shí)際測定時(shí)，標準溶液和待測溶液都要加以稀釋?zhuān)以趫蟾娼Y果時(shí)，多以100毫升（或1000毫升）中的含量來(lái)表示。因此，在實(shí)際計算時(shí)，就需要在上式中乘上稀釋因數。

求待測溶液濃度的方法有：直接比較法（計算法）、因數法和標準曲線(xiàn)法三種。這些方法在“生物化學(xué)及生物化學(xué)檢驗技術(shù)"課程中有介紹。

波長(cháng)的選擇：

由于有色溶液對光的吸收具有選擇性，因此進(jìn)行比色測定時(shí)，濾光片必須加以選擇，